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冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)

冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)

簡要描述:
冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù):冷凍保種(菌種/細(xì)胞凍存)是生物實(shí)驗(yàn)室長期保存微生物(細(xì)菌、真菌、藻類等)或細(xì)胞系的關(guān)鍵技術(shù),確保遺傳穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性

更新時(shí)間:2025-06-26

訪問量:25

廠商性質(zhì):其他

1. 冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)內(nèi)容概述

A. 適用樣本類型

  • 微生物:細(xì)菌(如大腸桿菌、乳酸菌)、酵母(如畢赤酵母)、絲狀真菌、噬菌體等。

  • 細(xì)胞系:哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如HEK293、HeLa)、干細(xì)胞、原代細(xì)胞等。

  • 特殊樣本:難培養(yǎng)微生物(如厭氧菌)、基因編輯菌株(如CRISPR改造菌)。

B. 服務(wù)項(xiàng)目

項(xiàng)目描述
標(biāo)準(zhǔn)凍存使用甘油或DMSO凍存液,-80℃或液氮保存。
優(yōu)化凍存方案針對(duì)脆弱菌種(如支原體)定制凍存保護(hù)劑。
復(fù)蘇驗(yàn)證凍存后復(fù)蘇,檢測存活率、污染及功能(如質(zhì)粒保留、基因表達(dá))。
庫存管理提供條形碼標(biāo)簽、電子數(shù)據(jù)庫記錄(凍存時(shí)間、位置、基因型等)。
快遞運(yùn)輸干冰或液氮罐運(yùn)輸凍存管,確保全程低溫。

2. 冷凍保種實(shí)驗(yàn)服務(wù)技術(shù)流程

A. 標(biāo)準(zhǔn)凍存步驟(以大腸桿菌為例)

  1. 前處理

    • 培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期(OD600≈0.6-0.8)。

    • 離心收集菌體,去除殘留培養(yǎng)基(避免冷凍損傷)。

  2. 凍存液制備

    • 常用保護(hù)劑:15-30%甘油(細(xì)菌)或10% DMSO(哺乳細(xì)胞)+培養(yǎng)基。

    • 特殊配方:如海藻糖(提高真菌存活率)。

  3. 分裝與標(biāo)記

    • 分裝至凍存管(推薦1.5 mL螺口凍存管),標(biāo)注菌株名稱、日期、濃度。

  4. 冷凍程序

    • 梯度降溫:4℃ 30 min → -20℃ 1 h → -80℃長期保存(或直接液氮?dú)庀啵?/p>

    • 程序冷凍儀:精確控制降溫速率(如1℃/min,適用于敏感細(xì)胞)。

  5. 液氮保存

    • 轉(zhuǎn)移至液氮罐(氣相:-150℃至-196℃),避免液相中管爆裂。

B. 復(fù)蘇驗(yàn)證

  1. 快速解凍(37℃水浴,<1 min)。

  2. 涂板或液體培養(yǎng),檢測:

    • 存活率(CFU計(jì)數(shù) vs 凍前)。

    • 遺傳穩(wěn)定性(PCR驗(yàn)證目標(biāo)基因、質(zhì)粒保留率)。

    • 污染檢測(無抗生素平板培養(yǎng)、16S rRNA測序)。


3. 關(guān)鍵注意事項(xiàng)

A. 提高存活率的策略

  • 保護(hù)劑優(yōu)化

    • 細(xì)菌:甘油濃度需匹配菌種(如乳酸菌需20%甘油+5%脫脂奶粉)。

    • 細(xì)胞:血清替代物(如HyClone FBS)減少批次差異。

  • 冷凍速率

    • 快速冷凍(直接-80℃)適合多數(shù)細(xì)菌,慢速冷凍(程序降溫)適合真核細(xì)胞。

B. 避免常見問題

問題原因解決方案
復(fù)蘇后無生長保護(hù)劑濃度不當(dāng)或凍存液未混勻重新優(yōu)化保護(hù)劑,渦旋混勻后再凍存。
細(xì)胞破裂冰晶形成(降溫過慢)添加冷凍保護(hù)劑(如DMSO),程序降溫。
污染(真菌/支原體)凍存前樣本不純或操作污染凍存前抗生素處理、PCR檢測。

4. 用戶常見問題(FAQ)

Q1:凍存菌種能保存多久?

  • -80℃:細(xì)菌通常2-5年,酵母1-3年(定期復(fù)蘇驗(yàn)證)。

  • 液氮:>10年(需避免溫度波動(dòng))。

Q2:如何運(yùn)輸凍存菌種?

  • 干冰運(yùn)輸:維持-78℃,適合短期(<3天)。

  • 液氮罐:長期運(yùn)輸需專業(yè)容器(如Taylor-Wharton液氮罐)。

Q3:凍存后基因會(huì)突變嗎?

  • 風(fēng)險(xiǎn)較低,但建議:

    • 保存早期傳代菌株(避免累積突變)。

    • 關(guān)鍵菌株備份多管(避免反復(fù)凍融)。


6. 延伸服務(wù)

  • 菌種鑒定:16S rRNA測序、MALDI-TOF質(zhì)譜分析。

  • 專l保藏:協(xié)助提交至中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)或ATCC。


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