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    想知道免疫熒光實驗的雙標記方法嗎?

    發(fā)布時間: 2021-08-25  點擊次數(shù): 2168次
     
      免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發(fā)展早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合,利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。
      免疫熒光實驗是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素制成熒光標記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細胞或組織內的相應抗原(或抗體)。在細胞或組織中形成的抗原抗體復合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質、定位,以及利用定量技術測定含量。
      免疫熒光實驗的雙標記方法:
      免疫熒光的雙標記是指同時標記細胞內兩種蛋白質分子,當懷疑某種配體與已知受體結合后可用此方法加以證明。此方法稍微復雜一些,應注意所用的一抗是來自不同種屬動物的兩種特異性抗體(例如:A抗體為多克隆抗體,來自家兔;B抗體為單克隆抗體,來自小鼠)。其次,兩種二抗所帶熒光素的發(fā)射光不應重疊,且盡量遠離,通??梢赃x擇FITC和TRITC、Alex488和TRITC、FITC和Cy5,或Cy3和Cy5等來組合。通常情況下,染色時兩種一抗可以同時孵育,然后可以同時孵育兩種二抗。但當染色結果一種顏色非常弱,而另一種顏色比較強時,應考慮先孵育顏色較弱的二抗。其他步驟同**熒光單標記。
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