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    成年小鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞原代培養(yǎng)

    發(fā)布時(shí)間: 2024-03-19  點(diǎn)擊次數(shù): 1549次

     

     

    1. C57小鼠,8-10周,通過(guò)頸椎脫位處死,浸入75%乙醇浸泡5分鐘,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤(pán)中。

    2. 使用眼科剪和鑷子,使髖關(guān)節(jié)脫臼,保持股骨頭完整。

    3. 用止血鉗去除每個(gè)股骨頭的軟骨帽,將組織放入含2%雙抗的PBS中。

    4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關(guān)節(jié)軟骨小心移到2ml離心管中。

    5. 用眼科剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,加入3ml預(yù)熱的Collagenase D1.5mg/ml)。

    6. 放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第一次消化,時(shí)間2h 。

    7. 第一次消化結(jié)束后,加入含血清的培養(yǎng)基終止消化,40um的細(xì)胞篩過(guò)濾后,離心1500rpm,2min

    8. 沉淀用DMEM培養(yǎng)基重懸,計(jì)數(shù),種植在24孔板中。

    9. 在未消化的組織中加入3ml預(yù)熱的Collagenase D,放入37℃、80rpm的搖床中進(jìn)行第二次消化,時(shí)間2h,然后收集細(xì)胞。


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